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藥物誘導基因敲除實驗
更新時間：2025-07-24
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廠商性質：其他
一、藥物誘導基因敲除實驗核心系統(tǒng)及原理
他mo昔芬（Tamoxifen）誘導系統(tǒng)
時間可控性強，避免胚胎期致死問題；
高靈敏度版本（如Cre-ERT2）對4-OHT的敏感性提升10倍。
原理：將Cre重組酶與突變型雌激素受體（ER-LBD）融合形成Cre-ER(Tam)融合蛋白。未給藥時，該蛋白與熱休克蛋白（HSP90）結合并滯留于細胞質；給藥后，他mo昔芬與ER結合，釋放Cre進入細胞核，介導loxP位點間的重組。
優(yōu)勢：
四環(huán)素誘導系統(tǒng)（Tet-On/Tet-Off）
Tet-Off系統(tǒng)：無需四環(huán)素時，tTA蛋白激活Cre表達；給予多xi環(huán)素（Dox）則抑制Cre活性，適用于持續(xù)敲除場景。
Tet-On系統(tǒng)：需Dox激活rtTA蛋白才能啟動Cre表達，適用于短期誘導。
應用：常用于發(fā)育階段特異性基因功能研究，如肺上皮細胞基因敲除。
干擾素誘導系統(tǒng)（Mx1-Cre）
通過注射polyI:C或干擾素誘導Cre表達，適用于免疫細胞或肝臟等干擾素響應組織的研究。
二、藥物誘導基因敲除實驗設計流程
構建Flox小鼠：在目標基因兩側插入loxP序列，確保基因正常功能不受影響。
選擇Cre工具鼠：根據(jù)實驗需求選擇組織特異性或藥物誘導型Cre品系（如Alb-CreERT2用于肝臟特異性敲除）。
藥物處理：
他mo昔芬：成年小鼠連續(xù)5天腹腔注射（75-100 mg/kg），溶解于玉米油或葵花籽油。
多xi環(huán)素：通過含藥飼料（600 mg/kg）連續(xù)喂養(yǎng)14天。
表型分析與驗證：通過PCR、Western blot或熒光報告系統(tǒng)確認敲除效率。
三、應用場景
疾病模型構建：如腫瘤研究中誘導性敲除致癌基因，觀察腫瘤發(fā)生動態(tài)。
發(fā)育生物學：研究特定發(fā)育階段（如胚胎期或成年期）基因功能。
組織特異性研究：結合組織特異性啟動子（如神經(jīng)元Nestin啟動子），解析基因在特定細胞類型中的作用。
四、注意事項
藥物交叉污染：處理組與對照組需分籠飼養(yǎng)，避免他mo昔芬通過糞便交叉誘導。
脫靶效應：部分Cre品系存在本底活性（如Cre-ERT2的泄露表達），需設置嚴格對照。
劑量優(yōu)化：藥物濃度和給藥頻率需根據(jù)動物年齡、品系調整，避免毒性。
