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條件性基因敲除實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2025-07-24
訪(fǎng)問(wèn)量：456
廠(chǎng)商性質(zhì)：其他
一、條件性基因敲除實(shí)驗(yàn)原理與核心系統(tǒng)
Cre-loxP系統(tǒng)
組織特異性：將Cre基因連接至特定啟動(dòng)子（如心肌細(xì)胞αMyHC啟動(dòng)子），實(shí)現(xiàn)靶向器官敲除。
時(shí)間誘導(dǎo)：
CreERT系統(tǒng)：Cre與突變雌激素受體（ERT）融合，注射他mo昔芬（Tamoxifen）后激活重組功能。
Tet-on/off系統(tǒng)：通過(guò)強(qiáng)li霉素（DOX）調(diào)控rtTA轉(zhuǎn)錄因子，控制Cre表達(dá)。
起源與機(jī)制：源自P1噬菌體，由Cre重組酶和34bp的loxP位點(diǎn)組成。Cre酶識(shí)別loxP方向并介導(dǎo)DNA重組，根據(jù)loxP排列實(shí)現(xiàn)基因刪除、反轉(zhuǎn)或易位。
時(shí)空特異性控制：
替代重組系統(tǒng)
Flp-FRT/Dre-Rox系統(tǒng)：作用類(lèi)似Cre-loxP，但重組效率較低，應(yīng)用較少。
二、條件性基因敲除小鼠的構(gòu)建流程
基礎(chǔ)步驟：
Step 1：構(gòu)建"Flox小鼠"——在目標(biāo)基因關(guān)鍵外顯子兩側(cè)插入同向loxP序列。
Step 2：選擇表達(dá)Cre的工具鼠（組織特異性或誘導(dǎo)型）。
Step 3：雜交繁育，獲得Flox/Cre雙陽(yáng)性小鼠，Cre表達(dá)時(shí)靶基因被切除。
誘導(dǎo)方法示例：
Tamoxifen誘導(dǎo)：75–100 mg/kg腹腔注射，連續(xù)5天（溶解于玉米油或葵花籽油）。
DOX誘導(dǎo)：通過(guò)飲水或飼料給予強(qiáng)li霉素，激活Tet系統(tǒng)。
三、條件性基因敲除實(shí)驗(yàn)核心應(yīng)用場(chǎng)景
解決傳統(tǒng)敲除局限性：
避免胚胎致死（如抑癌基因PTEN全身敲除致胚胎死亡）。
研究基因在特定發(fā)育階段或組織中的功能（如神經(jīng)元、腸道上皮）。
疾病機(jī)制研究：
腎病模型：髓系特異性核因子ⅠB敲除揭示腸道炎癥機(jī)制。
腫瘤學(xué)：Pten條件敲除小鼠模擬前列腺癌、膠質(zhì)瘤等發(fā)病過(guò)程。
神經(jīng)科學(xué)：PDGFB基因在Tamoxifen誘導(dǎo)后影響皮質(zhì)神經(jīng)元功能。
藥物研發(fā)：
他mo昔芬對(duì)腸道菌群的影響評(píng)估。
靶向基因編輯驗(yàn)證抗癌藥物敏感性。
