一、電融合實驗技術定義與核心原理
電融合是一種利用電場誘導細胞膜結構改變，促使兩個或多個細胞融合形成雜交細胞的技術。其核心原理基于電穿孔效應的延伸：
細胞膜極化與排列：
交流電場（AC，頻率0.5–1.5 MHz）使細胞表面電荷極化，形成偶極子，驅動細胞沿電場線緊密排列成"珠鏈狀"（雙向電泳效應）。
膜穿孔與融合觸發：
短時高壓直流脈沖（DC，強度1–3 kV/cm，脈寬10–50 μs）擊穿相鄰細胞的接觸區細胞膜，形成臨時孔隙，脂質雙層在表面張力作用下重組融合。
細胞質混合與修復：
膜融合后胞質互通，細胞器重新分布，最終形成完整異核體（細胞核暫未融合）或多核融合細胞。
關鍵突破：1978年Zimmermannshou次實現植物原生質體電融合，奠定技術基礎。
二、電融合實驗標準化操作流程
1. 細胞預處理
| 細胞類型 | 處理方法 | 目標 |
|---|---|---|
| 植物原生質體 | 纖維素酶/離析酶消化細胞壁 → 蔗糖梯度純化 | 獲得無壁裸露細胞 |
| 動物細胞 | 低滲緩沖液（0.3M甘lu醇）洗滌 → 調整密度至10? cells/mL | 去除血清干擾，增強電導率 |
| 卵母細胞/胚胎 | 透明帶酶解（如鏈霉蛋白mei）→ 去除卵丘細胞 | 暴露細胞膜便于接觸 |
2.電融合參數設置
儀器配置：ECM2001+、Multiporator等系統（集成AC/DC雙功能）。
核心參數：
步驟 參數范圍 作用 AC排列 頻率0.5–1.5 MHz，電壓50–150 V 細胞定向排列成鏈 DC脈沖融合 場強1–3 kV/cm，脈寬10–50 μs × 1–3次 擊穿接觸區細胞膜 緩沖液 低離子強度（0.3M甘lu醇 + 0.1–1mM Ca2?） 增強電導率，促進膜重組
3. 融合后處理
復蘇培養：37℃培養液靜置30分鐘，修復細胞膜。
雜交細胞篩選：
HAT培養基（雜交瘤技術）或熒光染料標記追蹤融合效率。
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