一、青光眼動物模型構建分類與選擇
1. 高眼壓模型（模擬原發性開角型青光眼）
| 模型類型 | 適用動物 | 造模方法 | 優缺點 |
|---|---|---|---|
| 激光誘導 | 大鼠、小鼠、兔 | - 氬激光光凝房角（需前房注射印度墨汁增強吸收） - 參數：50-100 μm光斑，0.1-0.5 s，50-100 mW | ? 可精確控制眼壓升高幅度 ? 需熟練操作，可能引發炎癥反應 |
| 微球注射 | 小鼠、大鼠 | - 前房注射聚苯乙烯微球（10 μm，5-10 μL，阻塞小梁網） - 可聯合viscoelastic凝膠延長高眼壓 | ? 操作簡單，眼壓穩定維持2-4周 ? 需定期監測眼壓（Tonolab） |
| 激素誘導 | 兔（新西蘭白兔） | - 地s米松滴y液（0.1%，每日2次，持續4-6周） | ? 模擬糖皮質激素性青光眼 ? 僅適用于兔，眼壓升高較緩慢 |
2. 視神經損傷模型（模擬青光眼性視j病變）
| 模型類型 | 適用動物 | 造模方法 | 應用場景 |
|---|---|---|---|
| 視神經鉗夾 | 大鼠（SD/Wistar） | - 手術暴露視神經，用顯微血管夾（壓力50-70 g）夾持5-10秒 | ? 直接模擬軸突損傷 ? 需開顱操作，損傷不可逆 |
| NMDA興奮毒性 | 小鼠、大鼠 | - 玻璃體內注射NMDA（20-40 nmol/μL，2 μL）誘導RGC凋亡 | ? 快速誘導RGC死亡（24-72小時） ? 不涉及眼壓升高 |
3. 遺傳性青光眼模型
DBA/2J小鼠：自發突變導致虹膜萎s、房角關閉，眼壓逐漸升高（6-12月齡）。
特點：模擬原發性閉角型青光眼，需長期觀察。
Myocilin突變小鼠：過表達人突變MYOC基因（如Tyr437His），誘導小梁網功能障礙。
二、青光眼動物模型構建關鍵實驗步驟與注意事項
1. 眼壓監測
儀器選擇：
小鼠/大鼠：TonoLab或Tono-Pen（需麻醉，如異f烷）。
兔：Goldmann壓平眼壓計（局部麻醉）。
測量頻率：造模后每日或隔日測量，持續2-4周。
2. 視網膜神經節細胞（RGC）評估
標記方法：
逆行標記：上丘注射熒光金（FluoroGold），1周后視網膜鋪片計數RGC。
免疫染色：Brn3a（RGC特異性標記物）+ DAPI核染。
功能檢測：
視網膜電圖（ERG）：評估視網膜整體功能（需排除角膜混濁影響）。
模式ERG（PERG）：特異性反映RGC功能。
3. 視神j病理分析
軸突計數：視神經橫截面透射電鏡（TEM）或甲苯胺藍染色。
膠質細胞活化：GFAP免疫組化（星形膠質細胞增生標志）。
三、模型驗證與數據分析
成功標準：
眼壓持續升高>25 mmHg（小鼠）或>30 mmHg（大鼠）超過7天。
RGC數量減少≥30%（對照眼相比）。
對照組設計：
假手術組（僅做角膜穿刺無激光/注射）。
對側未處理眼（自身對照）。
四、常見問題與解決方案
| 問題 | 可能原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
| 眼壓升高不穩定 | 微球阻塞不w全/激光能量不足 | 增加微球濃度或激光功率，重復操作 |
| 角膜混濁影響檢測 | 激光/注射損傷角膜 | 使用透明角膜膏（如羥丙基甲基纖維素）保護 |
| RGC標記失敗 | 逆行標記時間不足 | 延長熒光金擴散時間至7-10天 |
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