感染疾病模型構(gòu)建

一、感染疾病模型構(gòu)建通用原則

1. 病原體選擇：

• 臨床分離株（貼近人類感染）或?qū)嶒?yàn)室標(biāo)準(zhǔn)株（如大腸桿菌ATCC 25922）。

2. 動(dòng)物選擇：

• 小鼠（常用）、大鼠、倉(cāng)鼠、豚鼠或非人靈長(zhǎng)類（如HIV研究需人源化小鼠）。

• 免疫缺陷鼠（如SCID、NSG）用于研究宿主免疫機(jī)制。

3. 感染途徑：

• 模擬自然感染途徑（如呼吸道、消化道、血液等）。

二、常見(jiàn)感染疾病模型構(gòu)建方法

1. 細(xì)菌感染模型

示例：肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）肺部感染

• 步驟：

1. 培養(yǎng)細(xì)菌至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（OD600≈0.6），離心后重懸于PBS。

2. 麻醉小鼠，氣管內(nèi)滴注50 μL菌液（1×10^6 CFU，劑量需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定）。

3. 監(jiān)測(cè)體重、存活率，24-72小時(shí)后取肺組織進(jìn)行CFU計(jì)數(shù)和病理分析。

• 關(guān)鍵指標(biāo)：

• 肺組織細(xì)菌載量（CFU/g）、炎癥因子（IL-1β、TNF-α）、肺水腫（濕/干重比）。

2. 病毒感染模型

示例：流感病毒（H1N1）呼吸道感染

• 步驟：

1. 病毒擴(kuò)增（MDCK細(xì)胞），測(cè)定TCID50。

2. 麻醉小鼠，鼻內(nèi)接種50 μL病毒液（1×10^3 TCID50）。

3. 每日監(jiān)測(cè)體重，3-7天后取肺組織檢測(cè)病毒載量（qPCR）和病理變化。

• 注意事項(xiàng)：

• 需在BSL-2及以上實(shí)驗(yàn)室操作。

• 使用免疫缺陷鼠時(shí)需降低病毒劑量（如1×10^2 TCID50）。

3. 真菌感染模型

示例：白色念珠菌（Candida albicans）系統(tǒng)性感染

• 步驟：

1. 培養(yǎng)真菌至對(duì)數(shù)期，PBS洗滌后調(diào)整濃度（1×10^6 CFU/mL）。

2. 尾靜脈注射100 μL菌液（1×10^5 CFU/小鼠）。

3. 觀察生存曲線，取腎臟、脾臟進(jìn)行CFU計(jì)數(shù)和組織病理學(xué)（PAS染色）。

• 關(guān)鍵點(diǎn)：

• 免疫抑制小鼠（如環(huán)lin酰胺預(yù)處理）可增強(qiáng)感染表型。

4. 寄生蟲(chóng)感染模型

示例：瘧原蟲(chóng)（Plasmodium berghei）血液感染

• 步驟：

1. 從感染小鼠采血（含蟲(chóng)紅細(xì)胞），稀釋至1×10^6寄生紅細(xì)胞/mL。

2. 腹腔或尾靜脈注射100 μL（1×10^5寄生紅細(xì)胞）。

3. 每日采血涂片（吉姆薩染色），計(jì)算寄生蟲(chóng)血癥（感染紅細(xì)胞百分比）。

三、感染途徑選擇

四、表型驗(yàn)證方法

1. 病原體載量：

• 細(xì)菌/真菌：組織勻漿后CFU計(jì)數(shù)。

• 病毒：qPCR檢測(cè)病毒核酸或空斑試驗(yàn)。

• 寄生蟲(chóng)：顯微鏡計(jì)數(shù)或熒光報(bào)告基因檢測(cè)。

2. 宿主反應(yīng)：

• 組織病理學(xué)（HE染色、免疫組化）。

• 炎癥因子（ELISA或流式細(xì)胞術(shù)）。

• 免疫細(xì)胞浸潤(rùn)（流式檢測(cè)巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等）。

五、注意事項(xiàng)

1. 生物安全：

• 根據(jù)病原體危險(xiǎn)等級(jí)（BSL-1至BSL-4）選擇對(duì)應(yīng)防護(hù)措施。

2. 劑量?jī)?yōu)化：

• 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定LD50或ID50，避免動(dòng)物快速死亡或無(wú)表型。

3. 對(duì)照設(shè)置：

• 空白對(duì)照（PBS）、滅活病原體對(duì)照、免疫抑制對(duì)照（如適用）。

4. 倫理終點(diǎn)：

• 設(shè)定人道終點(diǎn)（如體重下降≥20%需安樂(lè)si）。