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發(fā)布時(shí)間： 2022-05-30 點(diǎn)擊次數(shù)： 1883次細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等），使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)是伊萊博生物的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一。培養(yǎng)多種細(xì)胞并能在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定或瞬時(shí)轉(zhuǎn)染特定的受體或蛋白，耐藥細(xì)胞株的構(gòu)建。生長(zhǎng)抑制及細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的生物化學(xué)研究：可提供包括G蛋白、cAMP、DAG、CREB、鈣離子、MAPK傳導(dǎo)通路等多種信號(hào)分子在內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究技術(shù)支持。凋亡測(cè)定(caspases,annexinVandDNAfragmentation，線粒體膜電位的測(cè)定),細(xì)胞凋亡及周期測(cè)定（流式細(xì)胞術(shù)）與細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的實(shí)驗(yàn)：黏附、轉(zhuǎn)移和侵襲與細(xì)胞分化相關(guān)的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞衰老實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)的細(xì)胞培養(yǎng)具體步驟和要求以及注意事項(xiàng)：一、復(fù)蘇1、把凍存管從液氮中取出來(lái)，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。2、把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來(lái)），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。3、把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。4、標(biāo)好細(xì)胞種類(lèi)和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。5、3天換一次培養(yǎng)基。二、傳代1、培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。2、把原有培養(yǎng)基吸掉。3、加適當(dāng)?shù)囊鹊癰酶（能覆蓋細(xì)胞就行），消化1-2分鐘。4、細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。5、用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來(lái)。6、把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。7、倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來(lái)。8、根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。三、凍存把細(xì)胞消化下來(lái)并離心（同上）。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫(xiě)明細(xì)胞種類(lèi)，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過(guò)夜，然后放到液氮灌中保存。凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。
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